- 产品介绍
- 商品属性
- 资料下载
- 产品问答
储存温度:常温运输和储存,保质期12个月。
储存事项:
1. 本试剂盒常温运输和储存,12个月不影响使用质量。AIPzol建议收到产品后4℃避光保存,保质期2年不影响使用效果。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:
1. 本试剂盒是普通柱式TRIzol法提取试剂盒的升级版,其中AIPzol组分是传统TRIzol 的免氯仿升级版,并配套了离心柱技术,经过多次漂洗去除各种杂质,简化了实验操作,并最大限度得到高纯度的RNA。可广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品中提取Total RNA。
2. 本试剂盒中AIPzol组分与传统柱式试剂盒中TRIzol组分提取方法相比,本产品不需要使用氯仿进行分层,操作更简单便捷,且全程操作可在常温进行,同时AIPzol去除DNA能力比传统TRIzol更强大,提取得到的RNA纯度更高,基本无DNA残留污染。
3. 本试剂盒不需要DNA酶柱上消化,提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern Blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司的特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3. 独有的AIPzol配方,可以有效的消除基因组DNA污染。
4. 多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了RNA纯度。
注意事项:
1. 第一次使用前请按照组分标签瓶提示,先在漂洗液RW瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入无水乙醇,以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。
3. AIPzol和去蛋白液PE中含有刺激性有害化合物,操作时要配戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~2Kb(28S),~1Kb(18S),条带亮度比值约为2 : 1。有时候也可以看到~0.1Kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
5. 加入AIPzol匀浆后,加水离心前样品可在-60℃至-70℃保存一个月以上。
6. 若提取细菌样本RNA,推荐使用爱普科学的AipEasy Plus 细菌RNA快速提取试剂盒(目录号:RE261)。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
提示:第一次使用前请按照组分标签瓶提示,先在漂洗液RW瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 样本处理
动物组织: | 取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每15-50mg组织样本加入0.5mL AIPzol,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入0.5mL AIPzol,混匀。 |
植物组织: | 取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在 AIPzol中迅速研磨,每25-50mg组织加入0.5mL AIPzol,混匀。 |
贴壁细胞: | 尽量去除干净残留培养液后,直接往直径3.5cm的培养板中加入0.5mL AIPzol覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的AIPzol加入量(每10cm2加0.5mL)。当AIPzol量不足时可导致抽提的RNA中污染含有DNA。 注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,但这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出全部RNA,实验继续做即可。 |
悬浮细胞: | 离心收集细胞。在AIPzol试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每1-5×106的动物细胞、植物细胞或每5×106细菌加0.5mL AIPzol。在加入AIPzol前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些细菌可能需要使用匀浆器。 |
液体样本: | 每200μL(低于200μL时,可用RNase-free Water补足)血浆、血清等液体样本,加入0.5mL AIPzol后振荡混匀。 |
2. 向上述裂解液中加入2/5体积的RNase-free Water(每500μL AIPzol加200μL水),剧烈振荡混匀,室温静置5 min。
注意:当处理样本量较大50mg左右时,可延长室温静置时间到10-15 min。
3. 室温12,000rpm 离心15 min。
4. 离心后溶液分成上层水相(含RNA)和下层沉淀(含蛋白质、DNA、多糖等杂质),小心吸取上层水相至一个新的离心管中。
注意:上层水相约占总体积的90%,如用500μL AIPzol进行提取,上层水相约为630 μL,建议吸取500μL;提取微量样本时,为减少RNA损失,可以全部转移上清。
注意:当样本量较小时,离心后可能不会出现下层沉淀,属于正常现象,可继续按后续步骤完成提取。
5. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能的沉淀转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内,12,000rpm 离心30 sec,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。
注意:吸附柱容积为750μL,若混合液超过该体积,请分多次进行上柱。请弃废液后将吸附柱放回收集管,继续转入剩余混合物到吸附柱RA中离心。
6. 加500μL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 sec,弃废液。
7. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 sec,弃废液。
8. 重复步骤7一次。
9. 将吸附柱RA放回空收集管中,12,000rpm离心2 min,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 将吸附RA转移至一个新的1.5mL离心管中,向吸附柱膜中间部位悬空滴加40-60μL的RNase-free Water,静置1 min,12,000rpm 离心1 min。如果需要提高RNA产物浓度,可将RNase-free Water于90℃预热;也可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1 min进行洗脱。如果需要提高RNA产物获取量,可再加30μL RNase-free Water,离心1 min,合并两次洗脱液。
注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,RNA产量越高,但是浓度将会降低。如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小洗脱体积建议最好不少于30μL,体积过小会降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | AIPzol Universal Total RNA Rapid Extraction Kit(Centrifugal Column) |
规格: | 100T/200T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
最新发布
-
PVDF免疫印迹膜 PVDF Western Blotting Membranes 0.2um 30cm*3M
一般描述PVDF免疫印迹膜是疏水性的聚偏二氟乙烯(PVDF)...
¥2451 -
针式过滤器,焊接式,PVDF/亲水聚偏氟乙烯,13mm*0.45um(进口膜)
针式过滤器 进口膜 焊接式 PVDF(亲水聚偏氟乙烯) 13...
¥340 -
透析袋(宽10MM/直径6MM/1000分子量)
透析袋,宽10MM,直径6MM,1000分子量
¥530 -
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE),100mg/1ml
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE) ...
¥400