储存温度：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 因此运输和储存均在室温下(15℃－25℃)进行。裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free Water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3. 独有的裂解液RL配方，可以有效的消除基因组污染。

4. 多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。

5. 有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

注意事项：

1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。

3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，使用前需要自备氯仿。

5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~2Kb(28S)，~1Kb(18S)，条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。

6. 检测OD₂₆₀/OD₂₈₀吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。

7. 加入裂解液RL匀浆后，加氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量乙醇！

1. 取1mL裂解液RL，转入1.5mL离心管中，备用。

2. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取60-100mg细粉转入上述装有裂解液RL的离心管，立即用手剧烈振荡20秒充分裂解(可以手动或者电动匀浆提高产量)。

3. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15-30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。

4. 可选步骤(一般不需要)：12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase-free的离心管中。当样品富含多糖或是植物的块茎部分时可能需要此额外的分离步骤。

5. 每1mL 裂解液RL加0.2mL氯仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。

6. 于4℃ 12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加裂解液RL体积的50%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。

7. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱RA中，请分两次转入吸附柱RA中)。

8. 12,000rpm 离心45秒，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。

9. 加500μL 去蛋白液RE，12,000rpm 离心45秒，弃掉废液。

10. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000 rpm 离心45秒，弃掉废液。

11. 重复步骤10一次。

12. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

13. 取出吸附柱RA，放入一个RNase-free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μL RNase-free Water，室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟,或者另外再加30μL RNase-free Water，离心1分钟，合并两次洗脱液。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积最好不少于30μL，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

产品说明书.pdf