适用范围：适合动物组织、植物材料、细胞、病毒、液体样本、微生物等样本。

储存事项：常温运输，4℃避光保存，室温保存12个月，4℃保存24个月。

产品介绍：

    AIPzol是传统TRIzol的免氯仿升级版，广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品中提取Total RNA和Small RNA。与传统TRIzol提取方法相比，本产品不需要使用有毒的氯仿进行分层(分层步骤使用ddH2O替代)，操作更简单、更便捷，且全程可在常温进行。

    AIPzol与传统TRIzol一样属于通用型总RNA提取试剂，具有和TRIzol类似的适用范围。绝大部分常规动物组织细胞(如：肝脏、肾脏、脑组织、培养细胞)、简单植物组织(如水稻、玉米、拟南芥、烟草、小麦等)都有良好效果。但是对于多糖多酚植物如棉花，某些难破壁的细菌等样品不适用。

    AIPzol去除基因组DNA能力比传统TRIzol更强大，提取得到的RNA纯度更高、完整性更好，提取的RNA基本无基因组DNA残留污染。提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern-Blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

1. 自备试剂：异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75% 乙醇(用RNase-free Water配制)、 RNase-free Water或者DEPC处理过的水。

2. 本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品(如防护服装、手套、眼罩、面罩等)。如果不小心接触，应立即用大量的清水冲洗，严重的请立即前往医院治疗。

3. RNA最重要的指标就是没有降解且完整性高，目前常用的用于测量浓度的分光光度计(包括Nanodrop)是无法通过测量OD260/OD280和OD260/OD230来确认RNA是否降解的。判断RNA是否降解，可以通过跑1%琼脂糖电泳检测，通过直接观察28S:18S比值来判断是否降解，或者采用安捷伦Bioanalyzer 2100仪器检测，测定RNA产物的RIN值。

RNA抽提操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：用AIPzol抽提RNA时，请佩戴手套、口罩和护眼罩，避免接触皮肤和衣服，实验操作应在化学通风橱完成操作，避免呼吸道吸入。如无特殊说明，所有的操作应该在15~30°C的室温条件下进行。

1. 样本处理

2. 向上述裂解液中加入2/5体积的RNase-free Water(每500μL AIPzol试剂加200μL水)，剧烈振荡、混匀，室温静置5 min。

注：当处理样本量较大50mg左右时，可延长室温静置时间到10-15 min。

3. 室温12,000rpm 离心15 min。

4. 离心后溶液分成上层水相(含RNA)和下层沉淀(含蛋白质、DNA、多糖等杂质)，小心吸取上层水相至一个新的无酶离心管中。

注：上层水相约占总体积的90%，如用500μL AIPzol试剂进行提取，上层水相约为630μL，建议吸取500μL；提取微量样本时，为减少RNA损失，可以全部转移上清。

注：当样本量较小时，离心后可能不会出现下层沉淀，属于正常现象，可继续按后续步骤完成提取。

5. 加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温静置10 min。

6. 室温12,000rpm 离心10 min，通常可以看见白色沉淀，小心弃去上清。

注：RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧壁和管底形成薄片状沉淀(样品量少的情况下，RNA沉淀散在管侧壁和管底有可能看不到明显沉淀)。部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸取上清。

7. 加入1mL 75%乙醇(RNase-free Water配制)漂洗，涡旋震荡15 sec，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

8. 室温12,000rpm 离心3 min，小心弃上清。

9. 重复操作步骤7和8漂洗一遍，小心弃尽上清。

注：为减少杂质残留，应尽可能的将上清弃干净。建议弃去大部分上清后，短暂点甩离心将残留液体甩至管底，用无酶的200μL吸头吸尽残留的液体，保留管底及管侧壁的白色RNA沉淀。

10. 室温晾干约1 min，在加入适量的RNase-free Water溶解沉淀，室温涡旋3 min(或使用移液器反复吹打管底和管壁的沉淀帮助溶解)，使RNA沉淀充分溶解。收集提取的RNA产物可直接用于下游相关实验或储存于-85℃至-65℃保存，在-30至-15°C仅可短期保存。

注：一般稍稍晾干RNA即可，过度干燥会导致RNA难于溶解。

注：从某些样本提取RNA时，RNA沉淀并非完全聚集在离心管管底，也会以均匀的薄雾状沉淀吸附在管侧壁上，请注意仔细观察，并用移液器吹打管底和沉淀所在的管侧壁充分溶解所有的RNA。

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