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AipBest CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)

货号:PD202-01

品牌:爱普科学

货期:现货

价格:450

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适用范围:适用于快速提取植物基因组DNA

产品储存:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:

1. 裂解液PL、或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。结合液PQ盐酸胍浓度高,加入乙醇后可能出现一些沉淀不影响使用,直接取上清用。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍:改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质(根据需要,上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA,进一步去除其它各种杂质),然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好,克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端

2. 操作安全,不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤

3. 快速简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成

4. 多种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应

注意事项:

1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3. 需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比24:1混合)、无水乙醇和β-巯基乙醇。

4. 结合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗

5. 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。

6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

7. 本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积,如果样品DNA含量低或者产量低,需要扩大提取量,还需要另外购买溶液

标准操作步骤(实验前请先阅读注意事项):

提示:第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!取所需适量裂解液PL放置在65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。

1. 取适量植物组织(新鲜组织100mg或干重组织30mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2. 转移细粉到一个1.5mL离心管,不要解冻,加600μL 65℃预热的裂解液PL(确认已加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。

注:如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。

3. 65℃水浴20-30分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

可选步骤:如果预计样品RNA丰富易残留,可在水浴前加入5-6μL RNA酶(20mg/mL)。如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。

注:如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾,条带扭曲,背景很高等不正常电泳情况,可以加1% RNA酶(10mg/mL)37℃或者室温放置半小时即可消化RNA,消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。

4. 加入700μL氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),13,000rpm 离心5分钟。

可选步骤(一般不需要):若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第4步前用等体积Tris饱和酚(PH8.0)/氯仿(1:1)抽提一遍。

5. 小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管,注意不要吸到界面物质。

可选步骤(一般不需要):如上清比较浑浊,则可重复步骤4一遍,直到得到透亮上清。

6. 较精确估算上清量,加入1.5倍体积结合液PQ(请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。

7. 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液(先加700μL离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。

8. 加入500μL抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃废液。

9. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

10. 加入600μL漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

11. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

12. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热),室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。

注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。

13. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。

附录:(低DNA含量或者产量低样品操作步骤)

1. 取适量植物组织(新鲜组织400mg或干重组织200mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2. 转移细粉到一个15mL离心管,不要解冻,加入9mL 65℃预热的裂解液PL(确认已经加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头吹打帮助裂解。

注:如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。

3. 室温放置60分钟,中间不时颠倒离心管以混合样品数次。

注:如果组织干燥或者产量低,可以放置在65℃水浴。

4. 加4.5mL氯仿/异戊醇(体积比24:1混合),涡旋充分混匀,3,000xg 离心10分钟。

5. 小心吸取上清到一个新的15mL离心管,注意不要吸到界面物质。重复一遍步骤4。

6. 小心吸取上清到一个新的15mL离心管,估算上清量,加入0.7倍体积的异丙醇,涡旋混匀来沉淀DNA。

7. 立刻3,000xg 离心20分钟沉淀DNA,弃上清,颠倒离心管口放在纸巾上控干残留液体,并小心用用移液枪吸干沉淀周围残留液体(不要过于干燥DNA沉淀)。

8. 加入300μL-400μL预热到65℃的灭菌水,重新溶解DNA,可能需要在65℃短暂温育帮助溶解,期间不断轻弹管底帮助溶解。

9. 加入1.5倍体积结合液PQ 450μL-600μL(请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。

10. 后续步骤和上面标准操作步骤7开始后完全一样

品牌: 爱普科学
产品别名: AipBest CTAB Plant Genome DNA Rapid Extraction Kit(Centrifugal Column)
规格: 50T/100T/200T
性状: 液体
储存温度: RT
保质期: 12个月
产品说明: 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存!
地址:北京市昌平区北清路1号珠江摩尔国际大厦5号楼2单元305
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