适用范围：适用于快速提取植物样本/真菌组织细胞基因组DNA。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 缓冲液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热)，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：

    该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从植物样本/真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样本/真菌样品DNA的纯化提取。提取过程不需要用到有毒的苯酚和氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。

    新鲜或干燥的植物样本/真菌组织细胞磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的操作步骤，进一步将多糖、多酚、细胞代谢物和蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱，得到高纯度基因组DNA。

产品特点：

1. 操作安全，不需要使用有毒的苯酚和氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 操作快速，简单便捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。

3. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好，克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280的典型比值可达1.7～1.9，可直接用于PCR、Southern-Blot和各种酶切反应等相关分子生物学实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3. 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 不同来源的真菌组织细胞材料中提取DNA的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。

5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

6. 真菌种类复杂，没有一种试剂盒可以提取所有种类的真菌DNA。如果有的真菌多糖多酚含量过于丰富、次级代谢产物太复杂导致本试剂盒效果不佳，可以选择本公司的CTAB法柱式植物DNA提取试剂盒(货号：PD202)提取真菌，一般该试剂盒对于多糖多酚次级代谢产物复杂的真菌DNA提取效果较好。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB和缓冲液AP3/E中按照标签提示加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在标签上打钩标记已加入无水乙醇，以免多次加入！

1. 取适量植物样本/真菌组织在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2. 转移细粉(新鲜组织100mg或干重组织20mg)到一个1.5mL离心管，不要解冻，加入400μL缓冲液AP1和4μL RNase A(10mg/mL)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。

注：如果组织裂解困难，可根据需要增加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。

可选：多糖含量特别高的时候，可以在AP1加入2% 的PVP40,000；多酚含量特别高的时候，可以在AP1中加入0.2% 的β-巯基乙醇。也可两者同时加入。

3. 65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。

注：此步骤也可室温操作，室温放置10分钟，但是DNA得率会降低一些。

4. 加入130μL缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5分钟，13,000rpm 离心5-10分钟，小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管，注意不要吸到界面物质。

5. 计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!)，立即吹打混匀。

注：加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。

6. 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液(先加650μL离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心)。

7. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

8. 加入600μL漂洗液WB，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

9. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB，室温放置3-5分钟，13,000rpm 离心1分钟，收集得到的DNA。DNA可以存放在-20℃，如果要长时间存放，可以放置在-70℃保存。

注：可将第一次得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，13,000rpm离心1分钟，可以提高10%左右的浓度。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

问题与解决方法：

产品说明书.pdf