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产品储存:室温储存12个月不影响使用效果,各溶液使用后应及时盖紧盖子。注意:蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中,常温运输,收到后,不超过25℃室温至少保存6个月,4℃保存12个月,-20℃保存2年。Poly Carrier常温运输,4℃可存放一个月,长期保存置于-20℃保存。
产品介绍:采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求,如病毒RNA:HCV(丙肝病毒)、HIV(艾滋病毒)和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒);病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
产品特点:
1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 节省时间,快速简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3. 多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR、RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等下游试验。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3. Poly Carrier使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Poly Carrier,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂解液VCB中加入2μL Poly Carrier储存溶液,将裂解液VCB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(裂解液VCB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的裂解液VCB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
提示:第一次使用前请先在10mL漂洗液RW中加入40mL无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 在一个新的1.5mL离心管内加入20μL蛋白酶K。
2. 向上述离心管内加入200μL血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足),加入200μL裂解液VCB,立刻涡旋振荡充分混匀。
注:如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低,建议在200μL裂解液VCB中加入2μL Poly Carrier储存溶液。
3. 56℃孵育15分钟。
4. 加入250μL无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,室温放置5分钟。
注:如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
5. 将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
6. 加入500μL去蛋白液RE,12,000rpm离心30秒,弃废液。
7. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液,加入500μL漂洗液RW,重复一遍。
8. 将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱RA,放入一个RNase-free的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μL RNase-free Water(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA/RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。
注:洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要DNA/RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于20μL,体积过小降低洗脱效率,减少DNA/RNA产量。
10. 病毒DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。病毒RNA建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | AipPure Viral Genome DNA/RNA Rapid Extraction Kit(Centrifugal Column) |
规格: | 50T/100T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存! |
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