适用范围：动物、植物、微生物、病毒DNA的探针法荧光定量PCR。

产品储存：4℃运输，-20℃避光保存，保质期24个月。使用前充分融解混匀。短期使用可放在4℃存放3周，可反复冻融达30次。

制品说明：

    本制品是采用Probe探针杂交法进行Real-Time PCR的专用试剂。已经将DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液等试剂，预混成一种适合Real-Time PCR反应检测用2× Premix Type试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。

    本制品采用全新的HotMaster Taq DNA热启动聚合酶，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高扩增效率，进行高灵敏度的Real-Time PCR反应。HotMaster Taq DNA聚合酶利用抑制剂通过温度调节方式封闭HotMaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。

    本制品含独立包装参比染料ROX Reference Dye储存液，浓度为50µmol (100×)，使用终浓度根据不同仪器为500nmol (1×，高浓度)或者50nmol (0.1×，低浓度)，用户可以根据不同型号PCR仪器的推荐使用浓度添加到荧光定量PCR反应体系内进行使用。ROX主要用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。客户可根据qPCR仪器技术指导自行决定是否需要添加ROX参比染料和需要添加的浓度。

    本制品含有4mM MgCl2(反应体系终浓度是2mM Mg2+)，可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。

ROX快捷用法：直接将ROX(100×)加入荧光定量Mix中配成含ROX工作液使用。

1. 需要高浓度ROX(终浓度为1×)：使用前，按照1mL体积2× Probe qPCR SuperMix(Non ROX)加入20µL体积ROX Reference Dye的比例加入，充分混匀后，即可直接使用。

2. 需要低浓度ROX(终浓度为0.1×)：使用前，按照1mL体积2× Probe qPCR SuperMix(Non ROX)加入2µL体积ROX Reference Dye的比例加入，充分混匀后，即可直接使用。

建议PCR条件：(以20μL和50μL反应体系为例，反应液配制请在冰上进行)

1. 不需要使用ROX机型：Roche Light Cycler 480、Roche Light Cycler 96、MJ Research Chromo 4、MJ Research Opticon 2、Takara TP-800、Bio-Rad iCycler iQ、Bio-Rad iCycler iQ5、Bio-Rad CF X96、Bio-Rad C1000 Thermal Cycler、Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000、Qiagen Corbett Rotor-Gene G/、Qiagen Corbett Rotor-Gene Q、Qiagen Corbett Rotor-Gene 3000、Thermo Scientific Pikoreal 96、Eppendorf Mastercycler ep realplex等。

2. 需要低浓度ROX机型：ABI 7500、ABI 7500 Fast、Stratagene Mx3000P、Mx3005P、Mx4000、ABI QuantStudio Dx/3/5、ABI QuantStudio 6/7/12K Flex、ABI ViiA7等。

注：从配制PCR反应的水溶液中减去Rox染料的体积。为使每个反应精确加入小体积的Rox(0.02µL)，推荐使用前将ROX Reference Dye(100×)储存液用PCR级水稀释50倍后使用，这样可以精确吸量小体积溶液。

3. 需要高浓度ROX机型：ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT and 7900HT Fast、ABI Step One、ABI Step One Plus等。

注：从配制PCR反应的水溶液中减去Rox染料的体积。为使每个反应精确加入小体积的Rox(0.2µL)，推荐使用前将ROX Reference Dye(100×)储存液用PCR级水稀释5倍后使用，这样可以精确吸量小体积溶液。

PCR循环：

注意事项：

1. 本制品含ROX参比染料，主要用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，客户可根据qPCR仪器技术指导自行决定是否需要添加ROX参比染料和需要添加的浓度。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本制品仅供科研使用，严禁用于临床诊断和药物等用途。