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产品储存:2-8℃运输,-2C℃保存,保质期12个月,尽量避免反复冻融。
产品简介:IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。蓝白斑筛选中,IPTG作为安慰性诱导物诱导细菌内的蛋白表达,X-gal作为生色底物。其原理为IPTG可诱导载体Lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α互补),实现α互补的细菌铺在含有X-gal生色底物的培养基上,可形成蓝色菌落;而外源DNA插入质粒的多克隆位点后,可破坏α互补作用,培养基上将长出白色菌落。IPTG也是常用的基因工程中重组蛋白表达的诱导剂。
0.1M IPTG储存液配制:
1. 称取0.238g IPTG;加入去离子水至10mL,完全溶解。
2. 用5-10mL去离子水润湿0.22μm针头过滤,IPTG溶液过膜除菌。
3. 分装成1mL,-20℃冻存,有效期可达1年。
蓝白斑筛选:
1. 制作平板:将100mL含琼脂培养基高压灭菌后的冷却至55℃以下时,加入500μL的X-gal溶液(20mg/mL)、250μL的IPTG溶液(50mg/mL)和100μL的抗生素(氨苄青霉素,100mg/mL),制作成含X-Gal、IPTG和抗生素(Amp)平板培养基。实际操作中X-gal和IPTG可以直接涂抹在平板培养基表面,90mm的平板,X-gal(20mg/mL)涂40μL,IPTG(50mg/mL)涂16μL。150mm的平板使用量加倍,待涂布的液体干后就可以使用。
2. 细菌铺板:37℃过夜培养,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色菌落为具有DNA插入片段的基因重组体)。
注意事项:
1. 含有IPTG的培养基4℃避光保存,须在1周内使用。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅供科研使用,严禁用于临床诊断和药物等。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | IPTG Solution(200mg/mL) |
规格: | 5mL |
性状: | 液体 |
储存温度: | -20℃ |
保质期: | 12个月 |
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