适用范围：适用于快速提取M13噬粒单链DNA。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 结合液MB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 操作安全，不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 节省时间，快速简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。

3. 产量高，典型的产量800µL M13丝状噬菌体上清可以提取3µg噬菌体单链DNA。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达650bp。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。

3. 结合液MB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

以800uL噬菌体感染细菌培养上清提取举例：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！

1. 将M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物分装在1.5mL离心管，12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。

2. 小心取800uL上清转入新的1.5mL离心管，加入400uL结合液MB，充分混匀。

注：如果使用的上清大于或者小于800uL，则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。

3. 将上述混合物加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液。

注：吸附柱一次最多只可以容纳大约700uL混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤3。

4. 加入600uL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

5. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

6. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加60uL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在50℃水浴中预热)，室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，10,000rpm离心1分钟。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于40uL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

7. DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

附录(M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程)：

下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的M13噬菌体(或M13来源噬粒)培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。

1. 37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌(如JM109)。

2. 使用6％的过夜培养菌接种新鲜的LB培养液，37℃振摇培养一个小时。

3. 根据M13噬菌体的储存液的浓度(滴度)按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养5-6个小时。

4. 将上面M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物分装在1.5mL离心管，12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。

5. 可选步骤：小心取1mL上清转入新的1.5mL离心管，重复步骤4离心5分钟。

注：这步有助于去除上清中残留的微量宿主菌RNA或者DNA。

6. 小心取800uL上清转入新的1.5mL离心管。

7. 现在可以按照操作步骤提取噬菌体单链DNA了。

问题与解决方法：

产品说明书.pdf