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客户同次批量样本qPCR扩增如何保证和解决较高的均一性问题?

Q:客户实验需求为同次批量样本,如何保证和解决qPCR扩增数据较高的均一性问题?

A:对于此类需求的客户来说,在进行荧光定量qPCR实验中如果要保证较高的均一性和各样本之间较小的误差,无疑需要从三个方面入手来解决此类问题,那就是最容易出问题的RNA提取环节、反转录环节和qPCR环节。下面小编就以爱普科学的实际客户案例结果来从这三个方面给与全面的剖析和解答。

l RNA提取环节:提取环节非常重要,因为提取环节人为操作较多,也就意味着出问题的环节较多,再有一个就是市面上RNA提取产品厂家较多,鱼龙混杂,每一家的提取效果参差不齐,对于客户需求的批量样本的均一性来说,RNA提取的纯度和完整性要求会更高,也就是说批量样本提取的纯度越高数值越接近,后续的实验环节出问题的概率就越小。所以在提取环节,一定要选择合适的提取试剂或提取盒子,以保证提取的RNA有较高的纯度和完整性。所以在提取步骤选择较好的RNA提取试剂盒,以提取较高纯度和较高完整性的RNA至关重要。爱普科学提取各类型的高品质RNA提取试剂盒,我们的提取试剂盒敢承诺只要严格按照说明书操作步骤进行,就敢保证客户能够提取出来高浓度高纯度完整性好的RNA,而且使用我们爱普科学的试剂盒不用跑电泳,即可直接进行后续相关实验。下图为客户使用我们爱普科学的RNA提取试剂盒的提取RNA的实验结果(高纯度RNA的OD比值一般在2.1-2.2)。

客户同次批量样本如何保障和解决较高的均一性问题?(图1)

l 反转录环节:反转录环节客户购买的是爱普科学的一步法基因组清除试剂盒,我们给出的方案是为了保证批量样本的均一性,在反转录环节尽可能的防止和降低干扰,客户可以不用基因组清除那一步,或者用的话把基因组清除稀释10倍后使用。

l qPCR扩增环节:对于客户要保证批量样本较高的均一性与各样本之间较小的误差,我们给出的方案是采用三步法扩增提高效率。总体来说在qPCR扩增环节人为干预最少,都是机器操作,基本上不会出问题。并且爱普科学的qPCR预混液单次生产几万只,批间差异极小,质量非常稳定,客户反馈极佳,qPCR预混液是我们出货量最大的产品之一,基本上都是0售后0差评,我们承诺只要是别家qPCR Mix能扩增出来的样本,我们的qPCR Mix就肯定没有问题。下图为客户用我们爱普科学反转录试剂盒反转后再进行qPCR扩增的实验结果,堪称完美。

客户同次批量样本如何保障和解决较高的均一性问题?(图2)

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