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产品保存:室温保存,保质期一年。
产品说明:
凝胶型号 | SP葡聚糖凝胶C-25 | SP葡聚糖凝胶C-50 | CM 葡聚糖凝胶C-25 | CM 葡聚糖凝胶 C-50 |
货号 | B1172 | B1173 | B1174 | B1175 |
基团 | -SO3-H+ | -SO3-H+ | -COO-H+ | -COO-H+ |
载量 | 2.0-2.6mmol/g | 2.0-2.6mmol/g | 4-5 mmol/g | 4-5 mmol/g |
颗粒大小 | 干粉 40-120 µm | 干粉 40-120 µm | 干粉 40-120 µm | 干粉 40-120 µm |
最大流速* | 150cm/h | 45cm/h | 150cm/h | 45cm/h |
工作 pH 值 | 6-10 | 6-10 | 4-13 | 4-13 |
pH 稳定性 | 2-12 | 2-13 | 2-12 | 2-13 |
*HR10/10 层析柱,5 cm 柱床高度
使用方法(仅供参考):
将干粉浸泡于纯水或缓冲液中,室温下完全溶胀需 1-2 天,100 度热水大概需要半个小时。完全溶胀后除去上清液,用缓冲液彻底清洗填料。
1. 装柱
⑴ 将所有实验材料均需平衡至进行色谱层析操作的温度。
⑵ 缓冲液脱气处理。
⑶ 在柱子下端加入纯水装柱子,以排除气泡,将填料连续倒入柱子时,要用玻璃棒紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降到填料体积不再变化,用上样的平衡液平衡柱后即可上样。
2. 上样
⑴ 最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上,其他杂质流出。然而,在一些情况下,结合杂质而使目标分子不结合而穿透柱子,也是可以的。
⑵ 对于目标分子的吸附,选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的,请参考下表;
pH interval | Substance | Conc.(mM) | Counter-ion | pKa(25℃) |
1.4-2.4 | Maleic acid | 20 | Na+ | 1.92 |
2.6-3.6 | Methyl malonic acid | 20 | Na+ or Li+ | 3.07 |
2.6-3.6 | Citric acid | 20 | Na+ | 3.13 |
3.3-4.3 | Lactic acid | 50 | Na+ | 3.86 |
3.3-4.3 | Formic acid | 50 | Na+ or Li+ | 3.75 |
3.7-4.7 | Succinic acid | 50 | Na+ | 4.21 |
5.1-6.1 | Succinic acid | 50 | Na+ | 5.64 |
4.-5.3 | Acetic acid | 50 | Na+ or Li+ | 4.75 |
5.2-6.2 | Methyl malonic acid | 50 | Na+ or Li+ | 5.76 |
5.6-6.6 | MES | 50 | Na+ or Li+ | 6.27 |
6.7-7.7 | Phosphate | 50 | Na+ | 7.20 |
7.0-8.0 | HEPES | 50 | Na+ or Li+ | 7.56 |
7.8-8.8 | BICINE | 50 | Na+ | 8.33 |
Handbook of chemistry and physics, 83rd edition, CRC, 2002-2003.
⑶ 缓冲液的离子强度应保持较低,以免干扰样品结合,推荐的操作 pH 在缓冲液的 pKa 的 0.5pH单位内,并且高于目标分子的等电点(pI)至少一个 pH 单位。
3.洗脱
对于 CM 葡聚糖凝胶和 SP 葡聚糖凝胶填料,使用递增的盐梯度(线性或者阶梯洗脱)或递增的 pH 梯度(线性或者阶梯洗脱)实现洗脱。
4.再生
根据样品的性质,通常通过用高离子强度缓冲液(例如 1-2M NaCl)洗涤,或降低缓冲液 pH,然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。 在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来,则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。
5.在位清洗(CIP)
⑴ 通过用 5 倍柱床体积的 2M NaCl 溶液来除去结合的蛋白质。
⑵ 通过用 2 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液清洗填料,随后用大量纯水或者缓冲液彻底清洗直至不含碱,从而除去沉淀的蛋白质,疏水结合的蛋白质和脂蛋白。
⑶ 用高达 70%的乙醇或 30%异丙醇溶液清洗填料,可以除去强疏水结合的蛋白质,脂蛋白和脂质。
⑷ 请避免使用磷酸,醋酸缓冲液,可以采用 Tris-HCl 作为使用 Buffer。
6.保存
使用完的填料,用纯水彻底冲洗,最后保存在 4℃(保存溶液为 20%乙醇),不能冷冻。未用过的产品室温密闭保存。
注意事项:
1. 上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
2. 在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.15 摩尔。碱会使流速变慢。
3. 离子交换介质在选择层析柱时,避免使用细长柱,会增加实验操作压力。
4. 不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
5. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
6. 本产品仅供科研使用,严禁用于临床诊断和药物等用途。
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | CM Sephadex C-50 |
规格: | 10g |
性状: | 粉末 |
储存温度: | RT |
保质期: | 一年 |
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