订货时间:周一至周五(9:00-17:30)
订货电话:010-62872425
订货Q Q: 247937283、1098867025
订货邮箱:order@ipresci.com
订单模板:批量订单.xls
问题描述 | 可能问题 | 解决方案 |
胶片上有反转像(即黑色背景,白色带) | 检测体系中HRP含量过高,底物消耗过快,导致过曝或空心。通常是由于样品中目的蛋白含量非常高、上样量过高、一抗或二抗用量过大、ECL类试剂的检测灵敏度过高等导致。 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
膜上有褐色条带/黄色条带或者条带出现空心 | ||
印迹在暗室中发光 | ||
信号持续时间少于8小时 | ||
信号弱或者无信号 | 系统中过多HRP耗尽了底物并导致信号迅速衰减 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
抗原或抗体的量不足 | 增加抗体或抗原的量 | |
蛋白质转移率低 | 优化转印 | |
HRP或底物活性低 | 为检测系统活性,暗室中,在一个清洁试管中制备1-2mL工作液。关闭灯,添加1uL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光,蓝色信号在随后的几分钟渐淡。 | |
高背景 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
封闭不充分 | 优化封闭条件 | |
封闭时机不合适 | 尝试一种不同的封闭试剂 | |
洗涤不充分 | 增加洗涤时间、次数或洗涤缓冲液体积 | |
胶片过度曝光 | 缩短曝光时间或使用背景消除剂 | |
抗原或抗体的浓度太高 | 减少抗体或抗原的量 | |
蛋白质条内有斑点 | 蛋白质转膜效率低 | 优化转印流程 |
膜的水化不均匀 | 按照制造商建议适度的使膜水化 | |
胶片与膜之间存在气泡 | 在胶片曝光前,去除气泡 | |
胶片上背景有斑点 | HRP标记二抗中存在聚集物 | 使用0.2um的过滤器 |
非特异性条带 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记的二抗稀释至少10倍 |
SDS导致的蛋白非特异性结合 | 在检测过程中不使用SDS | |
使用ECL发光液实验无任何结果 | ECL试剂是否失效 | 请将A液与B液等比例混合后置于一干净的离心管中,加入1微升HRP标记的二抗原液,混合均匀后可以看到蓝色荧光,如果看不到蓝色荧光说明试剂失效。 |
问题描述 | 可能问题 | 解决方案 |
胶片上有反转像(即黑色背景,白色带) | 检测体系中HRP含量过高,底物消耗过快,导致过曝或空心。通常是由于样品中目的蛋白含量非常高、上样量过高、一抗或二抗用量过大、ECL类试剂的检测灵敏度过高等导致。 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
膜上有褐色条带/黄色条带或者条带出现空心 | ||
印迹在暗室中发光 | ||
信号持续时间少于8小时 | ||
信号弱或者无信号 | 系统中过多HRP耗尽了底物并导致信号迅速衰减 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
抗原或抗体的量不足 | 增加抗体或抗原的量 | |
蛋白质转移率低 | 优化转印 | |
HRP或底物活性低 | 为检测系统活性,暗室中,在一个清洁试管中制备1-2mL工作液。关闭灯,添加1uL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光,蓝色信号在随后的几分钟渐淡。 | |
高背景 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
封闭不充分 | 优化封闭条件 | |
封闭时机不合适 | 尝试一种不同的封闭试剂 | |
洗涤不充分 | 增加洗涤时间、次数或洗涤缓冲液体积 | |
胶片过度曝光 | 缩短曝光时间或使用背景消除剂 | |
抗原或抗体的浓度太高 | 减少抗体或抗原的量 | |
蛋白质条内有斑点 | 蛋白质转膜效率低 | 优化转印流程 |
膜的水化不均匀 | 按照制造商建议适度的使膜水化 | |
胶片与膜之间存在气泡 | 在胶片曝光前,去除气泡 | |
胶片上背景有斑点 | HRP标记二抗中存在聚集物 | 使用0.2um的过滤器 |
非特异性条带 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记的二抗稀释至少10倍 |
SDS导致的蛋白非特异性结合 | 在检测过程中不使用SDS | |
使用ECL发光液实验无任何结果 | ECL试剂是否失效 | 请将A液与B液等比例混合后置于一干净的离心管中,加入1微升HRP标记的二抗原液,混合均匀后可以看到蓝色荧光,如果看不到蓝色荧光说明试剂失效。 |
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