适用范围：适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过25℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，－20℃保存2年。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸)，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。典型产量0.5μg-3.5μg/拭子。

产品特点：

1. 操作安全，不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 节省时间，快速简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3. 配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。

3. 结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少(口腔咽拭子上收集到的细胞很少)，我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入PolyCarrier。使用时在每个样品提取所需400μL结合液CB中加入4μL Poly Carrier，将结合液CB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫，请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

关于平衡液的使用：

1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

2. 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μL的平衡液至柱子中。13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在15mL漂洗液WB中加入60mL无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！

1. 样本采集：

1) 口咽拭子样本处理方式：取一根医用消毒棉签(手不要碰触脱脂棉部位)，伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭20次(不时旋转棉棒)，需充分接触口腔粘膜。用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入2mL离心管中，加入400µl裂解液mL。

注：采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前30 min内应该避免进食或者饮水。

2) 鼻咽拭子样本处理方式：将在咽部擦拭过的拭子转移到5mL离心管中，加入1mL-2mL的裂解液ML，涡旋振荡混匀。取出400µl的样品，用于后续提取。

3) 唾液样本处理方式：按照要求取唾液并转移至5mL离心管中，加入等体积的裂解液ML，涡旋振荡混匀。取出400µl的样品，用于后续提取。

4) 保存在拭子保存液中的拭子处理方式：在拭子保存液中加入1/5体积的裂解液ML。取出400µl的样品，用于后续提取。

2. 再加入20μL的蛋白酶K(20mg/mL)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。

3. 可选步骤(一般不需要做)：56℃放置30分钟，期间每10分钟涡旋混匀10秒。

注：一般情况下该步骤可以省略，除非效果不好，再尝试加做此步骤。

4. 加入400μL结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。此时溶液应变清亮。

注：如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组DNA产量过低于1μg，可以在400μL结合液CB中加入4μL Poly Carrier。

平衡液预处理吸附柱备用：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

5. 冷却后加200μL无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液滴，收集所有的液体到管底。

注：如果周围环境高于25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。

6. 将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

7. 加入500μL抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

8. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

9. 加入600μL漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

10. 将吸附柱AC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20-50μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。收集滤液，即为DNA溶液。

注：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

12. DNA可以短暂存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

问题与解决方法：

产品说明书.pdf