产品储存：本产品收到后按照上面指示温度存放各成份，12个月内有效。

产品介绍：凋亡中晚期细胞形态学变化为染色质在局部区域凝集，固缩，继而核碎裂出现凋亡小体。在Hoeschst染色下，细胞核或者凋亡小体的DNA会呈现致密浓染或者碎块状致密浓染。本试剂盒Hoechst染料紫外光激发波长350-370 nm；发射波长465 nm，在荧光显微镜下DNA发出蓝色荧光。

注意事项：

1. 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。

2. 需PBS或0.9%NaCl溶液，盖玻片与载玻片。

3. 荧光容易淬灭，应该尽量避光操作和保存。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

1. 贴壁细胞：

1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级1× PBS或0.9% NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

2) 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5mL固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

注：本试剂盒使用固定液主要为4％多聚甲醛，如果不适合您的细胞或者效果不佳，很多种固定配方如细胞固定液(甲醇：冰乙酸/3∶1)现配，都可以使用，可以根据自己细胞特点选用适合的固定方法。

3) 去固定液，用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。

4) 取5μL 100× 染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5-10分钟，也宜用摇床，或手动晃动数次。

5) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。

6) 滴一滴封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右。

注：封片液可使用50%PBS/50%甘油(等体积混合)，如果荧光淬灭太快影响观察，应该选用商品化的抗荧光淬灭封片液。

2. 悬浮细胞：

1) 离心收集细胞样品于1.5mL离心管内，加入0.5mL固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

2) 离心去固定液，用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。

3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μL液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

4) 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

5) 取5μL 100× 染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后均匀滴上染色5-10分钟，用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。

6) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。

7) 和贴壁细胞一样封片观察。

3. 组织切片：

1) 对于任何常见切片，处理至常规可以进行免疫染色时，或完成常规的免疫染色后，即可进行后续的Hoeschst染色。

2) PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。

3) 取5μL 100× 染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5-10分钟，也宜用摇床，或手动晃动数次。

4) 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。

5) 和贴壁细胞一样封片观察。

产品说明书.pdf