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产品储存:按照指定温度储存,12个月内不影响使用效果。
储存事项:避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:本试剂盒采用新型硅基质膜离心柱及特殊的缓冲液系统,可从聚丙烯酰胺凝胶中简捷高效回收20bp-500bp的短片段DNA片段,回收效率可高达85%。并可最大限度去除杂质,获得高纯度的DNA,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
产品特点:
1. 适用范围广泛,可以回收20bp-2kb的单链或者双链DNA。
2. 使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。
4. 快速便捷,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
2. 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。也可以选择可见光染料染色后在可见光下切胶会避免紫外对DNA损伤。
5. 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始DNA量和洗脱体积有关。
关于平衡液的使用:
1. 介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。
2. 使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μL的平衡缓冲液至柱子中。13,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在Binding Buffer瓶中加入指定量异丙醇!第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 切取含DNA片段的PAGE凝胶(100 mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入1.5mL离心管中,用移液枪头尽可能捣碎(最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。
2. 向凝胶中加入1-2倍体积的Diffusion Buffer(如100mg凝胶加入100-200μL Diffusion Buffer),55℃温浴30分钟-2小时,期间每15分钟涡旋震荡混匀,促进胶中DNA扩散到溶液中。
注:一般来说,回收片段越大,DNA扩散需要的时间越长,100bp左右的DNA片段温浴30分钟就可以(时间长些也不影响回收效果);如果回收500bp-1000bp的DNA片段,可以将温浴时间延长3-5个小时。也可以37℃温浴12-16小时过夜。
3. 12,000rpm离心5分钟。小心取上清转入新的离心管。记录上清体积。
4. 加入9倍上清体积的Binding Buffer,混匀。
注:回收片段>100bp时,加5倍上清体积的Binding Buffer即可。
平衡液预处理吸附柱:使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用”
5. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
注:吸附柱最大容积为750µL,若溶液体积大于750µL,可分批加入。
6. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
7. 重复步骤6一遍。
8. 将吸附柱EC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9. 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μL洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果需要较高浓度核酸,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
注:洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于25μL,体积过小降低核酸洗脱效率,减少产量。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipBest PAGE DNA Extraction Kit(Centrifugal Column) |
规格: | 50T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存! |
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