产品储存：-20℃运输和保存，有效期12个月。

产品浓度：浓度：200 units/μL

制品说明：本试剂盒是利用T7 RNA Polymerase，以含有T7启动子的线性化质粒DNA、PCR产物或合成的DNA为模板，以NTP为底物，在体外转录合成RNA。本试剂盒优化了RNA体外转录反应体系，可以简单快速获得大量的RNA分子，如果转录时在底物中加入修饰的核苷酸，可以制备生物素或染料标记的RNA。本试剂盒主要用于体外翻译、RNase保护实验、杂交探针标记、RNA剪切等生物实验。在反应体系中1μg的模板投入量可以产生大于100μg的RNA，适用于制备长度100-8000nt的RNA。

操作步骤：

1. 模板准备：

1) 以T7启动子的质粒为模板：为了得到特定长度的RNA，质粒模板必须完全线性化（需要纯化后作为模板），且线性化的质粒确保双链为平末端或5'突出端(避免出现3'突出端)，每个反应建议模板量为1μg；

2) 以T7启动子的PCR产物或合成的DNA片段为模板：PCR扩增模板时将T7启动子（5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'）加到非编码链引物的5'端。PCR产物可以不经纯化直接作为转录模板，但纯化后会产出更多的RNA，每个反应建议模板量为0.5μg左右。

2. 转录反应：按照表格推荐反应体系在洁净的EP管中加入各种试剂，充分混匀后于37℃反应2h(如合成小于300 nt的RNA，建议将反应时间延长至4 h或更长时间)。

1) 反应完毕后向体系中加入1μL DNase I，37℃反应15min，消化转录的DNA模板。 

2) 转录合成的RNA经电泳分析、纯化后，可用于下游实验。

3. 转录产物定量、检测：通过紫外吸收法可以测定RNA浓度(游离核苷酸会影响定量的准确性，RNA产物需要纯化)；电泳检测推荐采用1%甲醛琼脂糖变性胶检测，电泳液为1× MOPS Buffer（10× MOPS Buffer：0.4M MOPS pH 7.0、0.1M Sodium Acetate、10mM EDTA）。

4. 凝胶制备方法：称取0.5g琼脂糖加入36mL RNase-free Water中，加热溶化后，加入5mL 10× MOPS Buffer。待溶液冷却至不烫手时，加入9mL甲醛溶液(37%)，混匀后倒胶。电泳检测时取适量RNA与RNA Loading Buffer混合，70℃孵育10min后冰浴2min，全部点样。电泳结束后用EB或 GelRed核酸染料(货号：P202)染色观察。

注意事项：

1. 人体皮肤表面含有丰富的RNase，实验时请带好实验手套、口罩，实验耗材无菌无酶，防止RNase污染。

2. 如需制备标记RNA，请替换试剂盒中的NTP Mix。

3. 试剂盒中对照模板转录长度为500nt。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本制品仅供科研使用，严禁用于临床诊断和药物等用途。

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