SuperKOD DNA Polymerase(With UltraPure dNTP Mixture)
货号:NS009-01
品牌:爱普科学
货期:现货
价格:¥420
- 产品介绍
- 商品属性
- 资料下载
- 产品问答
产品储存:4℃运输,-20℃保存,有效期24个月。
制品说明:KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3'→ 5'外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高,保真性是Taq的约50倍,同时具有合成速度快的特点,聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍,Taq DNA Polymerase 的2倍,达到100-138bp/秒,可以在短时间内获得高产量的扩增产物,特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物,扩增所得的DNA为平末端,可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
活性定义:75°C活性测定条件下,在30min 内摄入10nmoles 的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。
产品用途:主要用于PCR扩增,尤其用于PCR产物的克隆,DNA片段的平滑化。
建议PCR条件:(以50μL反应体系为例)
Components | Volume(50μL) | Final Concentration |
Template | Variable | <0.5μg |
Forward Primer 10μM | 1μL | 0.2μM |
Reverse Primer 10μM | 1μL | 0.2μM |
10× SuperKOD Buffer | 5μL | 1× |
UltraDNTP Mix (10mM each) | 1μL | 0.2mM |
SuperKOD DNA Polymerase | 0.25-0.5μL(1.25-2.5 U) | - |
ddH2O | Up to 50μL |
注:用无菌PCR级别的水补至终体积50μL。实际操作中计算好需补加水的量后,建议先加水,然后按上述顺序添加其它成分,最后添加KOD DNA Polymerase。充分混匀后,离心数秒使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。
注:在冰浴上混合PCR各种成分,防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。
PCR条件的优化:
1. 质粒或者噬菌体模板:(模板量5-20ng,循环参数如下表)
Cycling Parameters | <1kbp Target DNA | 1-2kbp Target DNA | 3-4kbp Target DNA | 5-6kbp Target DNA |
Step 1 | 94°C/2 min | 94°C/2 min | 94°C/2 min | 94°C/2 min |
Step 2 | 94°C/20 sec | 94°C/20 sec | 94°C/20 sec | 94°C/30 sec |
Step 3 | Ta/20 sec | Ta/20 sec | Ta/20 sec | Ta/30 sec |
Step 4 | 72°C/5-15 sec | 72°C/20-30 sec | 72°C/40-50 sec | 72°C/60-70 sec |
Step 5 | 72°C/5 min | 72°C/5 min | 72°C/5 min | 72°C/5 min |
Repeat step 2-4 for 30-35cycles | ||||
Ta= Tm-5°C |
2. 基因组DNA和cDNA模板:(基因组DNA模板量为50-100ng,1-2μL cDNA(起始转录用的RNA为500ng),循环参数如下表)
Cycling Parameters | <2kbp Target DNA |
Step 1 | 94°C/2 min |
Step 2 | 94°C/20-30 sec |
Step 3 | Ta/15-20 sec |
Step 4 | 72°C/20-60 sec |
Step 5 | 72°C/5 min |
Repeat step 2-4 for 30-35 cycles | |
Ta= Tm - 5°C |
注意事项:
1. 高保真KOD对于dNTP纯度要求很高,因此建议用本酶配套的超纯dNTP Mix。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本制品仅供科研使用,严禁用于临床诊断和药物等用途。
问题与解决方法:
问题 | 可能的原因 | 解决方法 |
没有PCR产物 | 设计的扩增靶序列太长。 | 设计稍短的扩增靶序列,以基因组DNA为模板KOD适合扩增不超过2kb左右的产物,以质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增6kb以下的DNA。 |
PCR条带弥散 | 1. 没有在冰上混合PCR反应液。 2. KOD扩增延伸速度为1kb/15-30秒,具有比其它聚合酶更快的延伸速度和延伸时间过长,有时会有拖尾弥散效应。 | 1. PCR反应液应该在冰上混合。 2. KOD DNA聚合酶应该最后加入,以防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。如出现拖尾效应,可缩短退火延伸时间或者减少酶量。 |
低产量 | 1. 模板为高GC含量。 2. 模板量太低。 | 1. 加入DMSO 2-5%,由于该酶的耐热性好,在应用于GC 含量高的模板等以及易产生高级结构的模板时,可在96℃以上进行变性。 2. 提高模板量。 |
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | SuperKOD DNA聚合酶(含超纯dNTP混合液) |
规格: | 250U/500U |
性状: | 液体 |
储存温度: | -20℃ |
保质期: | 24个月 |
产品说明: | 新!KOD酶是高保真酶,对于dNTP纯度要求极高,本公司KOD酶已经自带超纯dNTP mixture。 |
最新发布
-
PVDF免疫印迹膜 PVDF Western Blotting Membranes 0.2um 30cm*3M
一般描述PVDF免疫印迹膜是疏水性的聚偏二氟乙烯(PVDF)...
¥2451 -
针式过滤器,焊接式,PVDF/亲水聚偏氟乙烯,13mm*0.45um(进口膜)
针式过滤器 进口膜 焊接式 PVDF(亲水聚偏氟乙烯) 13...
¥340 -
透析袋(宽10MM/直径6MM/1000分子量)
透析袋,宽10MM,直径6MM,1000分子量
¥530 -
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE),100mg/1ml
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE) ...
¥400