储存条件：本试剂盒按照各成份指示储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 常温成份不合适的储存于低温(4℃或者－20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15℃－25℃)进行。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free Water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 方便简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，是目前世界上最简单快速的试剂盒。

3. 配套DNase I柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。

4. 世界领先，是同类产品中适应性广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。

5. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达2.0～2.2，无DNA残留，可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。

2. 需要自备乙醇，研钵(可选)。

3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇！

1. 直接研磨法(推荐)：

1) 新鲜植物组织称重后取100-200mg迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100-200mg放入研钵)，加入1mL裂解液RPA室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。

2) 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13,000rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。

3) 取480μL裂解物上清(在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

4) 立刻接操作步骤的步骤3。

2. 液氮研磨法：

1) 取500μL裂解液RPA，转入1.5mL离心管中。

2) 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50-100mg细粉转入上述装有RPA的离心管，立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。

3) 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。

4) 将裂解物13,000 rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。

5) 取裂解物上清(在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

6) 立刻接操作步骤的步骤3。

注：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1mL的裂解液RPA和100-200mg的样品。

3. 将混合物(每次小于720μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟，弃掉废液。

注：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

4. 加350μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13,000rpm离心30秒，弃掉废液。

5. DNase I工作液配制：取45μL DNase buffer和5μL RNase-free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。

注：DNase Buffer含Mn²⁺，可能有轻度发黄发黑，甚至黑色沉淀为正常现象，颠倒混匀后正常使用即可。

6. 向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液，室温(20-30℃)放置15分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。

7. 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12,000 rpm离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

8. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13,000 rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。

9. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱RA，放入一个RNase-free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μL RNase-free Water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量)，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟。

11. 如果预期RNA产量>30μg，加30-50μL RNase-free Water重复步骤10，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

注：洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

注：如果不需要做荧光定量PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略DNA酶柱上消化的步骤，具体就是第4步骤的“加350μL去蛋白液RW1”改成“加700μL去蛋白液RW1”，同时省略步骤5，6，7。

产品说明书.pdf